除了光谱学之外,色谱法可能是现代实验室中使用的主要仪器分析技术之一。有许多不同类型的色谱法,但它们都遵循相同的基本原理。实验室中使用的色谱法的主要形式之一是HPLC,而HPLC通常以UV检测器的形式与光谱相结合,从而产生了强大的HPLC-UV技术。
HPLC–液相色谱法进行分离
色谱法最初是一种在大气压下依靠重力进行分离的技术,但随着技术的进步,人们发现使用更高的压力(现在我们使用的压力在50到300巴之间)可以实现更快更好的分离。因此,随着时间的推移,高压液相色谱这一名称逐渐演变为高效液相色谱,因为分析家们意识到该技术的性能令人印象深刻。
色谱法是一门分离科学,它通过泵送或允许流动相流过固定相来分离分子。流动相携带样品通过色谱柱或其他固定相的装置。固定相通常由二氧化硅分子或聚合物制成。固定相可以是极性(正相)或非极性(反相),这取决于样品性质和所需的分离
流动相和固定相中样品分子之间的相互作用程度决定了样品如何分离成其组分。通过使用不同的色谱柱和溶剂组合,可以分析许多不同的样品类型——本文讨论了方法开发,使用不同的高效液相色谱柱化学以最大限度地提高方法开发的选择性 .
光谱法和色谱法——非常适合
色谱系统本质上非常简单——一种引入样品、固定相和流动相分离分子的方法,以及检测分离分子的手段。正是对样品进行分离后分析的能力赋予了色谱作为分析方法的强度。
色谱法中使用了许多不同的检测器——火焰离子、导热性和电子捕获是一些常用的检测器。但在液相色谱中,最常用的检测器可能是紫外线吸收,这就产生了HPLC-UV方法。
紫外线探测器利用分子吸收紫外线的能力——探测器可以使用更灵敏的单波长或可变波长。通过将紫外光穿过洗脱样品混合物的单个组分,并测量每个组分吸收的紫外光量,可以确定每个组分的单个数量。
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