治疗性寡核苷酸（oligos）是当今制药行业的一个重要研究领域。这些候选药物通常长8-50个核苷酸，并含有单链DNA或RNA。寡核苷酸通常使用离子轰击色谱法进行分析，本工作的目的是研究固定相类型和离子轰击剂类型的影响。提交的数据是一项更大研究的一部分，该研究将很快公布。
研究中使用的寡核苷酸是来自T5、T10、T15和T20系列的脱盐和冻干寡核苷酸，即它们只含有一种类型的碱：胸腺嘧啶。中间n-单体以杂质形式存在。色谱柱均为150 x 3.0 mm，2.5μm粒径，采用乙腈梯度。
图1显示了Kromasil Classic C18与Kromasal EternityXT C18的对比，使用50 mM的TEAA作为离子通道剂。可以看出，经典C18表现出更多的保留，而永恒XT表现出更好的选择性。
与寡核苷酸相关的一个问题是，它们很容易通过磷酸二酯酶降解。然而，如果磷酸基团改性为硫代磷酸，稳定性将显著提高；由此产生的硫代磷酸（PS）寡聚物不易降解。然而，改性的结果是PS改性寡聚物在每个改性磷酸基团上都有一个立体中心，导致2n-1个非对映体。这意味着对于一个20核苷酸长的寡核苷酸，将有2个 nineteen= 524 288 species present, all of these with an individual retention time in the chromatography. The partial resolution of these species results in peak broadening, further complicating chromatographic separation. A way of resolving the problem of this peak broadening is to use ion-pairing agents with longer alkyl chains such as TBuAA for example. This will mask the thiophosphate chiral center, and almost eliminate the selectivity between the different diastereomers.
图2色谱图显示了使用TBuAA作为离子起毛剂的效果，即使使用PS改性寡聚物也能达到尖峰。使用的相是含有未改性寡聚物的Kromasil C4和含有全硫代磷寡聚体的Kromassil Phenyl
从图3色谱图（图2的放大部分）可以看出，尽管存在大量不同的非对映体，但即使使用硫代磷寡聚物，也可能获得非常尖锐的峰。
总之，这些和进一步的研究表明，在分离寡核苷酸时，Kromasil Phenyl是一个很好的选择，它具有非常尖锐的峰和良好的选择性。
有关这些应用的色谱条件的更多详细信息，请访问 Kromasil网站 .
本研究由卡尔斯塔德大学马丁·恩马克博士提供。这项工作得到了瑞典知识基金会2016年KKS SYNERGY项目“BIO-QC：新生物药物的质量控制和纯化”（批准号20170059）的支持
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